離心機(jī)的重要性從實(shí)驗(yàn)中體現(xiàn)
離心機(jī)可以讓你實(shí)現(xiàn)一種簡易快速提取細(xì)菌(含革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌)和酵母染色體DNA的方法。
實(shí)驗(yàn)中,效率是關(guān)鍵,比如快速獲取微生物基因組DNA在基因克隆、重組子的篩選以及分類學(xué)中十分必需。
接下來介紹一種采用本法所提染色體DNA,可直接應(yīng)用于常規(guī)的分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),包括PCR、限制性內(nèi)切酶的切割,以及基因組文庫的構(gòu)建。其中,有個(gè)關(guān)鍵性實(shí)驗(yàn)設(shè)備——離心機(jī),少了它可不行。
1、 取1ml過夜培養(yǎng)菌液于8000g,離心機(jī)離心2min。去除培養(yǎng)基后,用400ul STE緩沖液(100mM NaCl,10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)重懸菌體,按相同條件離心清洗菌體兩次。
2、 收集的菌體用200ul TE緩沖液(10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)懸起后加約50mg 直徑425-600um 規(guī)格的玻璃珠,再加入100ul Tirs飽和苯酚。
3、 上述混合液在漩渦振蕩器上振蕩(細(xì)菌,振蕩60s;酵母,振蕩120s-200s),隨后于4℃,13000g,離心5min。
4、 吸取上層水相(約160ul)轉(zhuǎn)移至一個(gè)新的離心管中,加TE緩沖液補(bǔ)至200ul,再加入100ul氯仿混勻后,于4℃,13000g,離心5min。重復(fù)此步兩到三次。
5、 轉(zhuǎn)移上層水相(約160ul)至一個(gè)新的離心管中,補(bǔ)加40ul TE和5ul RNase(10mg/ml),37℃消化10min。
6、 加入100ul 氯仿混勻于4℃,13000g,離心機(jī)離心5min。
7、 轉(zhuǎn)移上層水相(約150ul)至一個(gè)新的離心管中。
8、 至此,上層水相即含有純化好的基因組DNA,可直接用于隨后的常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
以上就是簡單的實(shí)驗(yàn)講解,如果您想多多交流,可以前來我司參觀,我司生產(chǎn)供應(yīng)多種離心機(jī),還能提供定制。
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