常用上海盧湘儀離心機(jī)檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因大豆DNA成份的方法
實(shí)驗(yàn)需求常用實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備、盧湘儀高速冷凍離心機(jī)(12000r／min)、盧湘儀高速臺(tái)式離心機(jī)(12000r／min)、紫外分光光度計(jì)、磁力攪拌器、高壓滅菌鍋、PCR擴(kuò)增儀、電泳儀、紫外透射儀、凝膠成像系統(tǒng)或照相系統(tǒng)、重蒸餾水儀。
樣品中DNA的提取——CTAB法將100rag充分粉碎的大豆樣品，在液氮中充分研磨成粉末后加400pL冰上預(yù)冷的cTAB提取緩沖液I中。加入500txI。65~C預(yù)熱的CTAB提取緩沖液間不時(shí)輕緩顛倒混勻。待冷卻至室溫后加入儲(chǔ)備溶液，室溫下放置30rain。加入450gL三氯甲烷+異戊醇，輕緩顛倒混勻溶液。
將上清液轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中，依次加600pL異丙醇及60弘L乙酸鈉溶液，輕緩顛倒混勻。12000r／min離心10min。，棄上清液后再加入100ffL 70％乙醇洗滌沉淀。12000r／min離心5min，棄上清液。除去殘留的乙醇，待沉淀干燥后，DNA沉淀溶解于100ffL TE緩沖液中，一20℃保存?zhèn)溆谩?/FONT>
樣品中DNA的提取也可采用商品化基因組提取試劑盒提取。DNA溶液純度的測(cè)定和保存將DNA適當(dāng)稀釋，測(cè)定并記錄其在260nm和280nm的紫外光吸收率，以一個(gè)OD260值相當(dāng)于50fig／mI．DNA濃度來計(jì)算純化的DNA濃度。要求DNA溶液()D260／()D280值在1．7～2．O。依據(jù)測(cè)得的濃度將DNA溶液稀釋到25～50ng／mI．，一20℃保存。注：由于基因組DNA不宜反復(fù)凍融，因此建議對(duì)于需要經(jīng)常使用的DNA需要分裝，多管存放，需要使用時(shí)取出，融化后應(yīng)該立即使用，使用結(jié)束后，剩余的DNA應(yīng)在4℃冰箱短期保存，存放時(shí)間不宜超過14d。
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